Опыт. Изучение влияния различных значений pH
Опыт 4.3. Изучение влияния различных значений pH на активность фермента
Материалы и оборудование
Реактив Бенедикта
Буферные растворы с pH 3, 5, 7, 9 и 11
1%-ный раствор крахмала
Водяная баня с температурой 38 °С
Бунзеновская горелка
Асбест
Держатель для пробирок, штатив с пробирками
Градуированные пипетки на 5 мл
Термометр
Таймер
Дистиллированная вода
Исходный раствор амилазы (такой, какая содержится в слюне)
Методика
1. Сполосните рот 5 мл дистиллированной воды и выплюньте эту воду.
2. Наберите в рот 10 мл дистиллированной воды, пополощите в течение 1 мин и эту жидкость соберите.
3. Доведите объем этого раствора амилазы слюны до 40 мл дистиллированной водой.
4. Проверьте растворы амилазы, крахмала и буферные растворы на присутствие в них редуцирующих сахаров с помощью реактива Бенедикта.
5. Пометьте этикеткой «pH 3» одну из пробирок и внесите в нее 2 мл раствора крахмала.
6. Добавьте в ту же пробирку 2 мл буферного раствора с pH 3 и тщательно перемешайте оба раствора.
7. Прокипятите не менее 4 мл раствора фермента и влейте 4 мл этого раствора в пробирку с соответствующей этикеткой.
8. В другую пробирку, также снабженную этикеткой, влейте 4 мл раствора фермента, не подвергавшегося кипячению; поставьте все три пробирки в водяную баню и выждите некоторое время (около 1 мин) для того, чтобы они успели нагреться до 38 °С.
9. Влейте небольшое количество реактива Бенедикта в каждую из 11 пробирок и пометьте их цифрами 1—11. Следующие три этапа должны быть проведены очень быстро.
10. Когда растворы в водяной бане примут ее температуру, влейте забуференный раствор крахмала в некипяченый раствор фермента.
11. Хорошо перемешайте оба раствора, переворачивая пробирку, а затем снова поставьте пробирку в водяную баню.
12. Включите отсчет времени и сразу же перенесите небольшое количество реакционной смеси (примерно равное по объему взятому реактиву Бенедикта) в пробирку 1.
13. На протяжении всего опыта энергично встряхивайте смесь.
14. По истечении 1 мин перенесите в пробирку 2 вторую порцию реакционной смеси (приблизительно того же объема, что и первая).
15. Повторяйте ту же процедуру с интервалами 1 мин в течение еще 9 мин (т. е. заполните отобранными пробами пробирки 3-11).
16. Отметьте для пробирок 1-11 продолжительность инкубации, требуемой для появления первых признаков положительной реакции Бенедикта (выпадения кирпично-красного осадка).
17. Повторите тот же опыт с прокипяченым раствором фермента, начиная от п. 7.
18. Повторите весь опыт целиком с каждым из остальных буферных растворов.
19. Постройте график зависимости времени гидролиза от pH и объясните полученные результаты.
Литература. Биология : в 3 т. Т. 1 / Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут ; под ред. Р. Сопера
AOF | 04.01.2021 13:32:04